## 检测原理

2D荧光细胞活力测定法利用ATP依赖的荧光素酶催化反应，通过化学发光信号来测定细胞内ATP含量，以此检测细胞活力或定量活细胞数目。该检测方法具有广泛的线性范围、高灵敏度和良好的稳定性。在96孔板中，从100个到100,000个细胞的范围内展示出良好的线性关系，但不同细胞的检测数量上限会有所差异。此外，该方法操作简单，试剂盒提供的试剂为即用型，读数稳定，检测速度快，完成检测大约只需10分钟，无需对细胞进行洗涤或替换培养液。与其他常见的细胞活力检测方法（如Calcein-AT、CCK-8等）相比，2D荧光细胞活力测定法更加方便快捷。

## 产品优势

2D荧光细胞活力测定法（abs50065）具有高灵敏度和宽线性范围，能够兼容少量样品的检测以及大量样品的高通量筛选。其主要优势包括：

1. 方便快速：即用型检测试剂，稳定读数，检测速度快，约10分钟即可完成。
2. 灵敏度高：能够检测最低10nmol的ATP含量。
3. 线性范围广：在96孔板中，有效检测范围从100个细胞到100,000个细胞，不同细胞可能存在不同的检测上限。
4. 高通量：支持少量和大量样品的同时检测。

## 使用方法

### 一、试剂准备

1. 试剂融化：实验前一天将试剂取出，放置在4℃融化过夜；也可在实验当天在室温下融化或放在22℃水浴中融化，但需控制水温不超过25℃。
2. 平衡至室温：若试剂在非室温条件下融化，使用前可在22℃水浴下平衡至室温，一般5mL包装需约10分钟，50mL包装需约20分钟。
3. 混匀：使用前轻轻颠倒5次使溶液均匀。
4. 添加Triton X-100（abs9149）：吸取所需体积的试剂，加入适量Triton X-100至终浓度为0.2%。

### 二、检测步骤

1. 细胞培养：使用适合化学发光检测的96孔板（abs7149），每孔接种100μL细胞，设置不含细胞的培养基作为阴性对照。培养细胞于37℃、5% CO2环境中，适时添加药物处理。
2. ATP标准曲线的制作（可选）：制备ATP标准溶液并用PBS稀释，加入96孔板每孔100μL标准品。
3. 细胞活力检测：包括融解发光法检测试剂、平衡、添加检测试剂、振荡促进细胞裂解、静置使发光信号稳定、使用多功能酶标仪进行检测，计算细胞相对活力或ATP含量。

## 注意事项

1. 温度：试剂中含有荧光素酶，避免反复冻融。建议分装后在-20℃避光保存，使用前需平衡至室温。

2. 化学因素：荧光素酶的活性受培养基和血清成分影响，应设置对照以排除干扰。

3. 光敏感：试剂需避光保存，以免发光强度衰减。

4. ATP污染：操作时建议佩戴口罩和手套，避免接触污染源，确保环境的洁净。

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